樣(yang)品在液氮罐(guan)內(nei)浸(jin)泡不會被(bei)汙染,但前(qian)提(ti)是要(yao)嚴(yan)格(ge)遵(zun)循(xun)壹(yi)系(xi)列操(cao)作(zuo)規範(fan)和(he)預防措(cuo)施(shi)。液氮本(ben)身(shen)是壹(yi)種低溫的(de)氣體(ti),溫度(du)可(ke)達(da)到(dao)-196℃,其冷(leng)卻(que)能(neng)力(li)可(ke)以(yi)迅(xun)速凍結細(xi)胞和(he)生物樣(yang)品,從而(er)有(you)效(xiao)地(di)抑(yi)制(zhi)微(wei)生物(wu)的(de)生(sheng)長與(yu)繁殖(zhi)。因此(ci),在適(shi)當(dang)的(de)條(tiao)件(jian)下,樣(yang)品在液氮罐(guan)中能夠(gou)保持較長時(shi)間(jian)的穩(wen)定(ding)性和(he)純凈性。
安(an)全與(yu)衛生(sheng)管理(li)
為(wei)確保(bao)樣(yang)品在液氮中的安(an)全和(he)無汙染,操(cao)作(zuo)人員需(xu)要(yao)遵循(xun)以(yi)下幾(ji)個關鍵步驟:
1.
樣(yang)品準備(bei):在(zai)將樣(yang)品放入(ru)液氮罐(guan)之(zhi)前(qian),必(bi)須(xu)確保(bao)樣(yang)品處(chu)於無(wu)菌狀(zhuang)態(tai)。對(dui)於細(xi)胞培(pei)養樣(yang)品,應在(zai)超凈工(gong)作(zuo)臺(tai)中進行(xing)處(chu)理,並使(shi)用無(wu)菌器(qi)具(ju),如移(yi)液(ye)管和(he)培養皿(min)。
2.
儲(chu)存容(rong)器(qi)選(xuan)擇:選擇適合的(de)儲(chu)存容(rong)器(qi)至(zhi)關重要(yao)。通常使用液(ye)氮專用的(de)玻(bo)璃(li)或(huo)塑(su)料(liao)容(rong)器(qi),這(zhe)些(xie)容(rong)器(qi)經(jing)過(guo)特殊(shu)處(chu)理,能(neng)夠抵(di)禦低溫度(du)的(de)影(ying)響(xiang)。容(rong)器(qi)的(de)密(mi)封(feng)性也(ye)需(xu)檢(jian)查(zha),避免(mian)液氮蒸發(fa)引(yin)起(qi)的(de)汙染。
3.
快速浸(jin)泡:在將樣(yang)品放入(ru)液氮罐(guan)時(shi),需(xu)迅(xun)速並小(xiao)心(xin)地(di)將樣(yang)品浸入液(ye)氮中。長時(shi)間(jian)暴露(lu)在(zai)空氣中可能(neng)導致(zhi)樣(yang)品表面吸附水(shui)分或雜質,從而(er)提(ti)高(gao)汙染風險(xian)。建(jian)議在(zai)操(cao)作(zuo)時(shi)盡(jin)量減(jian)少樣(yang)品接觸空(kong)氣的(de)時(shi)間(jian),建(jian)議浸(jin)泡時(shi)間(jian)控制在幾(ji)秒(miao)鐘(zhong)之內(nei)。
4. 避免(mian)交叉(cha)汙染:在多樣(yang)品操(cao)作(zuo)時(shi),應使(shi)用不(bu)同(tong)的(de)工(gong)具(ju)來(lai)處(chu)理不(bu)同的(de)樣(yang)品,以防止交(jiao)叉(cha)汙染。例如,采用壹(yi)次(ci)性手(shou)套和(he)移(yi)液(ye)器(qi),每(mei)次(ci)處(chu)理完後(hou)立即(ji)更換(huan)。
5.
定(ding)期檢(jian)查(zha)液氮質(zhi)量:液氮的(de)純度(du)也會影(ying)響(xiang)樣(yang)品的安(an)全性。使(shi)用高(gao)純度(du)的液氮(如(ru)99.999%),可以有(you)效(xiao)降(jiang)低雜(za)質引(yin)入(ru)的(de)風險(xian)。定(ding)期檢(jian)查(zha)液氮罐(guan)的(de)狀(zhuang)態(tai),確保(bao)其正常工作,避免(mian)因為(wei)設備(bei)故障導致(zhi)樣(yang)品受損(sun)。
6. 記(ji)錄和(he)追蹤:建(jian)立樣(yang)品追蹤系統(tong),詳細(xi)記錄每(mei)個樣(yang)品的處(chu)理日(ri)期(qi)、操(cao)作(zuo)人員和(he)存儲(chu)位(wei)置(zhi)等信(xin)息(xi)。這(zhe)不僅可以方(fang)便(bian)管(guan)理(li),也能在出(chu)現問(wen)題(ti)時(shi)及(ji)時(shi)追溯(su)。
7.
樣(yang)品取(qu)出(chu)註意事項:在取(qu)出(chu)樣(yang)品時(shi),需(xu)確保(bao)設備(bei)和(he)環境的(de)清(qing)潔。取(qu)出(chu)樣(yang)品後的容(rong)器(qi)應盡(jin)快封(feng)閉(bi),避免(mian)再次(ci)暴(bao)露(lu)在(zai)空氣中。操(cao)作(zuo)完成後,立即(ji)將樣(yang)品放置(zhi)於幹(gan)燥、無菌環境中進行(xing)後續(xu)分析(xi)。
影(ying)響(xiang)因素
在液(ye)氮罐(guan)中,樣(yang)品的汙染主(zhu)要(yao)受到(dao)以下幾(ji)個因素影(ying)響(xiang):
-
容(rong)器(qi)材(cai)質:選(xuan)擇合適(shi)材(cai)質的(de)容(rong)器(qi)能(neng)夠減(jian)少樣(yang)品與(yu)外(wai)界(jie)的(de)接觸,降(jiang)低汙染風險(xian)。推(tui)薦(jian)使(shi)用液(ye)氮專用的(de)不(bu)銹鋼或(huo)玻璃材(cai)質容(rong)器(qi),普(pu)通(tong)塑(su)料(liao)容(rong)器(qi)可(ke)能因低溫而(er)發(fa)生變(bian)形,從而(er)增加(jia)泄漏(lou)風險(xian)。
-
液(ye)氮的(de)質量:液(ye)氮的(de)純度(du)直接關系到(dao)樣(yang)品的存儲(chu)效(xiao)果。氣體(ti)中的雜(za)質和(he)水分容(rong)易(yi)對(dui)樣(yang)品造成影(ying)響(xiang),使用高(gao)純度(du)液氮(如(ru)99.999%)有(you)助(zhu)於(yu)保持(chi)樣(yang)品的原始(shi)狀(zhuang)態(tai)。
- 操(cao)作(zuo)環境:在(zai)進行(xing)樣(yang)品處(chu)理時(shi),操(cao)作(zuo)環境的(de)潔凈程(cheng)度(du)非(fei)常(chang)重(zhong)要(yao)。應在(zai)符合生(sheng)物(wu)安(an)全標(biao)準的(de)環境(jing)中進行(xing)操(cao)作(zuo),確保(bao)空氣流動性良(liang)好(hao)且無汙染源。
對(dui)於生(sheng)物(wu)樣(yang)品及(ji)細(xi)胞系(xi),液氮冷(leng)凍保(bao)存是常(chang)見的保(bao)存方(fang)式(shi)之壹(yi)。以(yi)人(ren)類細(xi)胞為(wei)例,常用的(de)冷(leng)凍保(bao)護劑(ji)包括(kuo)DMSO(Dimethyl
sulfoxide),其濃(nong)度(du)壹(yi)般控制在5-10%之(zhi)間(jian),可(ke)以(yi)有(you)效(xiao)保(bao)護細(xi)胞在(zai)低溫下的(de)完整性。在(zai)冷凍過(guo)程(cheng)中,細(xi)胞外(wai)部的水(shui)分會(hui)迅(xun)速凍結形(xing)成冰晶(jing),而(er)DMSO的存在(zai)則(ze)能(neng)防(fang)止冰(bing)晶(jing)對(dui)細(xi)胞膜造(zao)成損(sun)傷,從而(er)提(ti)高(gao)細(xi)胞存活(huo)率(lv)。
在具體操(cao)作(zuo)中,細(xi)胞懸浮(fu)液(ye)應在(zai)-80℃冷藏(zang)24小(xiao)時(shi)後(hou)再轉(zhuan)移(yi)至(zhi)液(ye)氮罐(guan)中,這樣(yang)可(ke)以(yi)有(you)效(xiao)保(bao)證(zheng)細(xi)胞的(de)存活(huo)率(lv)和(he)純凈性。研(yan)究(jiu)表明(ming),細(xi)胞在(zai)液氮中存儲(chu)多(duo)達(da)10年(nian)仍(reng)能(neng)保持活(huo)力(li),且沒(mei)有(you)明(ming)顯的汙染跡象。
液(ye)氮的(de)蒸發(fa)速度(du)也是關鍵因素,若液(ye)氮蒸發(fa)過(guo)快(kuai),可(ke)能(neng)導致(zhi)樣(yang)品暴露(lu)於(yu)空氣中,增加(jia)汙染風險(xian)。理(li)想(xiang)情況(kuang)下,液(ye)氮罐(guan)應保(bao)持在(zai)滿(man)液氮狀(zhuang)態(tai),壹(yi)般每(mei)周(zhou)檢(jian)查(zha)壹(yi)次(ci)液(ye)氮的(de)液位(wei),確保(bao)其不低於(yu)安(an)全線(xian)。
在處(chu)理細(xi)胞和(he)生物樣(yang)品時(shi),液(ye)氮罐(guan)是壹(yi)個高(gao)效(xiao)而可(ke)靠的保存設(she)備(bei),只要(yao)嚴(yan)格(ge)遵(zun)循(xun)以(yi)上(shang)操(cao)作(zuo)規範(fan),樣(yang)品在液氮罐(guan)中浸泡的過(guo)程(cheng)就(jiu)可(ke)以實(shi)現無汙染的存儲(chu)效(xiao)果。
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